科普文章
一
校刊導語
為了營造良好的同行互動研討氛圍,加強課外自學專研,CSAVS自費組織專業(yè)獸醫(yī)師翻譯了著名小動物臨床獸醫(yī)文獻(暫時以貓科和骨科為主)供大家參考討論,拋磚引玉,歡迎更多的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師同行投入到繼續(xù)教育和終身學習中,與世界獸醫(yī)共同進步!
我們將定期在CSAVS公眾號無償發(fā)布部分基礎內容,將給老學員的郵箱無償發(fā)送部分進階內容,以饋同行,感恩學員和一路上相伴的新老朋友!
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二
懷疑幼貓感染性腹瀉的診斷
面對急需扭轉結果的需求,幼貓中廣泛認可的腸道致病菌數(shù)量及對成本控制需求增加,因此需要明智地進行糞便檢測。全面的臨床和流行病學評估必須定義疾病的嚴重程度和類型(如發(fā)熱、出血性腹瀉、醫(yī)院感染、炎癥性白細胞像),暴露(旅行史,生食或未煮熟的肉類產品,接觸病患,最近是否使用抗生素),以及確定動物或主人是否存在免疫缺陷,有助于糞便測試和優(yōu)化抗菌素治療。
了解不同糞便檢查技術的適應癥和局限性,對于優(yōu)化幼貓感染性腹瀉的診斷至關重要。在所有腹瀉幼貓中應考慮用于腸道寄生蟲診斷的糞便檢查技術包括:糞便直接滴片法檢查原生動物賈第鞭毛蟲的滋養(yǎng)體和三毛滴蟲;通過離心的糞便漂浮法來檢測寄生中卵囊,囊和卵細胞;糞便涂片的抗酸染色可以評估隱孢子蟲屬卵囊;賈第蟲屬的糞便ELISA、DFA和隱孢子蟲屬的DFA。使用Wright-Giemsa或Diff-Quik染色糞便涂片可以評估內生孢子、彎曲桿菌樣微生物和白細胞,診斷作用有限??稍诮Y腸炎或便秘的貓中進行直腸刮取物評估結腸直腸粘膜炎癥細胞、腫瘤細胞或感染因子。三毛滴蟲的糞便培養(yǎng)比較費時,且比市售的糞便PCR敏感度低。稍后將介紹離心的糞便漂浮,腸病原菌的糞便培養(yǎng),糞便免疫分析和糞便PCR的詳細概述。作者不提倡使用蘇丹IV染色劑進行糞便脂肪評估,因為該測試非常不敏感和非特異性。
三
通過離心的糞便漂浮
通過糞便漂浮試驗可以找到糞便中的囊、卵囊和卵細胞。已經描述了不同的漂浮程序,但并非所有都提供了寄生蟲鑒定的最佳條件。例如,離心的持續(xù)時間和速度以及離心后蓋玻片置于管上的時間都是很重要的。
應盡可能檢查新鮮糞便,或將新鮮標本冷藏不超過72h,通過濃縮技術檢測囊,卵囊或卵細胞。如果評估將推遲超過72h,可以將新鮮糞便放入10%的福爾馬林溶液中。福爾馬林固定的標本適用于濃縮技術,抗酸染色和免疫分析。雖然站立(重力)漂浮方法比離心漂浮更容易和快速(圖1-11),但后者顯然具有更高的敏感性(可達8倍)。如果采用重力漂浮法,糞便中寄生蟲少可能會產生假陰性結果。糞便漂浮法有局限性,不應該用來檢測不能漂浮的重卵(吸蟲屬)或幼蟲(貓圓線蟲屬)。
圖1-11:用自由擺動的離心機,在離心前放置一個蓋玻片
所使用的漂浮溶液類型及其比重是重要的考慮因素。作者推薦具有比重為1.18或1.20的硫酸鋅用于漂浮試驗。這種溶液和比重對卵細胞和賈第蟲卵囊是最佳選擇,同時保留了賈第蟲卵囊的結構細節(jié)。
四
離心漂浮試驗的操作步驟
五
補充
使用固定角度的離心機并且沒有自由搖擺的離心管時,應遵循上述程序,但離心管需要從頂部填充1英寸左右,最后旋轉時不添加蓋玻片。當最后的離心步驟完成時,將試管小心地放置在試管架中。使用移液管輕輕地將額外的漂浮溶液沿管的側壁加進去,同時盡可能少地擾亂糞便內容物。出現(xiàn)凸彎月面并在頂部放置蓋玻片。放置10min。吧蓋玻片取下放置于載玻片上,并按照步驟8中所述進行檢查。
六
腸道病原菌的培養(yǎng)
由于對腹瀉犬貓進行糞便腸道檢查的適應癥定義不清,導致不加區(qū)別地測試和結果誤解。艱難梭狀芽胞桿菌、產氣莢膜梭菌、彎曲桿菌屬和沙門氏菌屬的糞便培養(yǎng)可能耗時且不敏感。另外,分離假定的細菌腸病原體并不表示因果關系。作者不鼓勵使用細菌培養(yǎng)分離產氣莢膜梭狀芽胞桿菌和艱難梭狀芽胞桿菌,因為兩種腸病原體分別基于腸毒素和毒素的檢測而不常與疾病相關,所述有機體具有可疑的致病性,分離可能需要長達72h。大多數(shù)臨床醫(yī)師喜歡使用實時PCR檢測沙門氏菌屬以及用于區(qū)分非致病性彎曲桿菌屬致病的病原體。大多數(shù)區(qū)域性獸醫(yī)參考實驗室能夠使用基于分子的方法來區(qū)分彎曲桿菌屬。
七
寄生蟲,病毒和細菌腸道致病菌PCR檢測
診斷賈第蟲屬感染一般通過糞便漂浮法,滴片法和糞便抗原檢測(ELISA或DFA)的結合診斷。由于糞便中的PCR抑制劑,賈第蟲的糞便PCR檢測可能有假陰性結果,并且PCR不應該用作該生物體的篩選工具。常規(guī)進行PCR的大型商業(yè)參考實驗室已納入大量對照組以確保操作中每一步的質量:定量DNA / RNA對照組以評估每個臨床樣品的質量,提取對照組每個DNA / RNA提取循環(huán)以確保沒有污染,和內部陽性和陰性對照以驗證每個實時PCR檢測的最佳性能和沒有污染。賈第蟲屬PCR檢測的主要適應癥是用于確定感染物種是否是人畜共患病集合物。后者測定可以在科羅拉多州立大學獸醫(yī)診斷實驗室(http://dLab.colostate.edu/)進行。這種PCR檢測不同于在商業(yè)參考實驗室進行的貓腹瀉實時PCR檢測(IDEXX Laboratories,Westbrook,Maine)或貓胃腸道快速PCR檢測(Antech Diagnostics,Irvine,California)。PCR可用于診斷幼貓隱孢子蟲屬,然而作者更喜歡采用DFA檢測可以在熒光顯微鏡下直接觀察卵囊。C. felis和C. canis的檢測并不能證明誰是引起臨床疾病的原因。糞便PCR檢測推薦用于診斷貓三毛滴蟲感染。然而,貓三毛滴蟲的DNA可以在健康貓攜帶者中檢測到,所以陽性結果必須結合動物病史,體檢檢查和環(huán)境進行解釋。PCR是檢測沙門氏菌屬和彎曲桿菌屬DNA的敏感方法,但如前所述,陽性結果并不一定需要抗生素治療。在貓中,糞便PCR檢測梭菌屬的陽性預測值低,最好與毒素免疫分析結合使用以提高診斷率。逆轉錄酶-PCR用于檢測糞便中的冠狀病毒RNA,然而陽性檢測結果并不能區(qū)分FECV和FIP誘導菌株,并且健康非腹瀉貓的冠狀病毒發(fā)病率很高。
臨床醫(yī)師有責任意識到每個糞便診斷測試的局限性和益處,并認識到僅僅檢測糞便中假定的腸病原體的DNA或檢測賈第鞭毛蟲屬包囊或隱孢子蟲屬卵囊并不能說明因果關系。應該認識到,一只幼貓表現(xiàn)出結腸炎跡象(里急后重,便血,糞便黏液增加,糞便量小,頻率明顯增加)并且糞便漂浮或ELISA檢測證明賈第鞭毛蟲屬感染,這只貓應該還有另一個引起結腸炎癥狀的原因,因為賈第鞭毛蟲是一種小腸病原體。應進一步調查小貓結腸炎的已知病因(例如三毛滴蟲、彎曲桿菌屬、產氣莢膜梭菌、艱難梭狀桿菌和食物不耐受)。
今天給大家分享的是“懷疑幼貓感染性腹瀉診斷”的一些研究結果。明天將給大家分享“對幼貓不明原因腹瀉的經驗性治療”的相關知識,請持續(xù)關注公眾號!
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