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科普文章
科普文章
一
校刊導(dǎo)語(yǔ)
為了營(yíng)造良好的同行互動(dòng)研討氛圍，加強(qiáng)課外自學(xué)專(zhuān)研，CSAVS自費(fèi)組織專(zhuān)業(yè)獸醫(yī)師翻譯了著名小動(dòng)物臨床獸醫(yī)文獻(xiàn)（暫時(shí)以貓科和骨科為主）供大家參考討論，拋磚引玉，歡迎更多的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師同行投入到繼續(xù)教育和終身學(xué)習(xí)中，與世界獸醫(yī)共同進(jìn)步！
我們將定期在CSAVS公眾號(hào)無(wú)償發(fā)布部分基礎(chǔ)內(nèi)容，將給老學(xué)員的郵箱無(wú)償發(fā)送部分進(jìn)階內(nèi)容，以饋同行，感恩學(xué)員和一路上相伴的新老朋友！
注：所選的文獻(xiàn)書(shū)籍均為CSAVS簽約講師著作，CSAVS尊重原作者版權(quán)，所有譯文不得用于任何商業(yè)用途，僅供內(nèi)部交流！
二
懷疑幼貓感染性腹瀉的診斷
面對(duì)急需扭轉(zhuǎn)結(jié)果的需求，幼貓中廣泛認(rèn)可的腸道致病菌數(shù)量及對(duì)成本控制需求增加，因此需要明智地進(jìn)行糞便檢測(cè)。全面的臨床和流行病學(xué)評(píng)估必須定義疾病的嚴(yán)重程度和類(lèi)型（如發(fā)熱、出血性腹瀉、醫(yī)院感染、炎癥性白細(xì)胞像），暴露（旅行史，生食或未煮熟的肉類(lèi)產(chǎn)品，接觸病患，最近是否使用抗生素），以及確定動(dòng)物或主人是否存在免疫缺陷，有助于糞便測(cè)試和優(yōu)化抗菌素治療。
了解不同糞便檢查技術(shù)的適應(yīng)癥和局限性，對(duì)于優(yōu)化幼貓感染性腹瀉的診斷至關(guān)重要。在所有腹瀉幼貓中應(yīng)考慮用于腸道寄生蟲(chóng)診斷的糞便檢查技術(shù)包括：糞便直接滴片法檢查原生動(dòng)物賈第鞭毛蟲(chóng)的滋養(yǎng)體和三毛滴蟲(chóng)；通過(guò)離心的糞便漂浮法來(lái)檢測(cè)寄生中卵囊，囊和卵細(xì)胞；糞便涂片的抗酸染色可以評(píng)估隱孢子蟲(chóng)屬卵囊；賈第蟲(chóng)屬的糞便ELISA、DFA和隱孢子蟲(chóng)屬的DFA。使用Wright-Giemsa或Diff-Quik染色糞便涂片可以評(píng)估內(nèi)生孢子、彎曲桿菌樣微生物和白細(xì)胞，診斷作用有限?？稍诮Y(jié)腸炎或便秘的貓中進(jìn)行直腸刮取物評(píng)估結(jié)腸直腸粘膜炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或感染因子。三毛滴蟲(chóng)的糞便培養(yǎng)比較費(fèi)時(shí)，且比市售的糞便PCR敏感度低。稍后將介紹離心的糞便漂浮，腸病原菌的糞便培養(yǎng)，糞便免疫分析和糞便PCR的詳細(xì)概述。作者不提倡使用蘇丹IV染色劑進(jìn)行糞便脂肪評(píng)估，因?yàn)樵摐y(cè)試非常不敏感和非特異性。
三
通過(guò)離心的糞便漂浮
通過(guò)糞便漂浮試驗(yàn)可以找到糞便中的囊、卵囊和卵細(xì)胞。已經(jīng)描述了不同的漂浮程序，但并非所有都提供了寄生蟲(chóng)鑒定的最佳條件。例如，離心的持續(xù)時(shí)間和速度以及離心后蓋玻片置于管上的時(shí)間都是很重要的。
應(yīng)盡可能檢查新鮮糞便，或?qū)⑿迈r標(biāo)本冷藏不超過(guò)72h，通過(guò)濃縮技術(shù)檢測(cè)囊，卵囊或卵細(xì)胞。如果評(píng)估將推遲超過(guò)72h，可以將新鮮糞便放入10％的福爾馬林溶液中。福爾馬林固定的標(biāo)本適用于濃縮技術(shù)，抗酸染色和免疫分析。雖然站立（重力）漂浮方法比離心漂浮更容易和快速（圖1-11），但后者顯然具有更高的敏感性（可達(dá)8倍）。如果采用重力漂浮法，糞便中寄生蟲(chóng)少可能會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果。糞便漂浮法有局限性，不應(yīng)該用來(lái)檢測(cè)不能漂浮的重卵（吸蟲(chóng)屬）或幼蟲(chóng)（貓圓線(xiàn)蟲(chóng)屬）。
圖1-11：用自由擺動(dòng)的離心機(jī)，在離心前放置一個(gè)蓋玻片
所使用的漂浮溶液類(lèi)型及其比重是重要的考慮因素。作者推薦具有比重為1.18或1.20的硫酸鋅用于漂浮試驗(yàn)。這種溶液和比重對(duì)卵細(xì)胞和賈第蟲(chóng)卵囊是最佳選擇，同時(shí)保留了賈第蟲(chóng)卵囊的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。
四
離心漂浮試驗(yàn)的操作步驟
五
補(bǔ)充
使用固定角度的離心機(jī)并且沒(méi)有自由搖擺的離心管時(shí)，應(yīng)遵循上述程序，但離心管需要從頂部填充1英寸左右，最后旋轉(zhuǎn)時(shí)不添加蓋玻片。當(dāng)最后的離心步驟完成時(shí)，將試管小心地放置在試管架中。使用移液管輕輕地將額外的漂浮溶液沿管的側(cè)壁加進(jìn)去，同時(shí)盡可能少地?cái)_亂糞便內(nèi)容物。出現(xiàn)凸彎月面并在頂部放置蓋玻片。放置10min。吧蓋玻片取下放置于載玻片上，并按照步驟8中所述進(jìn)行檢查。
六
腸道病原菌的培養(yǎng)
由于對(duì)腹瀉犬貓進(jìn)行糞便腸道檢查的適應(yīng)癥定義不清，導(dǎo)致不加區(qū)別地測(cè)試和結(jié)果誤解。艱難梭狀芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、彎曲桿菌屬和沙門(mén)氏菌屬的糞便培養(yǎng)可能耗時(shí)且不敏感。另外，分離假定的細(xì)菌腸病原體并不表示因果關(guān)系。作者不鼓勵(lì)使用細(xì)菌培養(yǎng)分離產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌和艱難梭狀芽胞桿菌，因?yàn)閮煞N腸病原體分別基于腸毒素和毒素的檢測(cè)而不常與疾病相關(guān)，所述有機(jī)體具有可疑的致病性，分離可能需要長(zhǎng)達(dá)72h。大多數(shù)臨床醫(yī)師喜歡使用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)沙門(mén)氏菌屬以及用于區(qū)分非致病性彎曲桿菌屬致病的病原體。大多數(shù)區(qū)域性獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室能夠使用基于分子的方法來(lái)區(qū)分彎曲桿菌屬。
七
寄生蟲(chóng)，病毒和細(xì)菌腸道致病菌PCR檢測(cè)
診斷賈第蟲(chóng)屬感染一般通過(guò)糞便漂浮法，滴片法和糞便抗原檢測(cè)（ELISA或DFA）的結(jié)合診斷。由于糞便中的PCR抑制劑，賈第蟲(chóng)的糞便PCR檢測(cè)可能有假陰性結(jié)果，并且PCR不應(yīng)該用作該生物體的篩選工具。常規(guī)進(jìn)行PCR的大型商業(yè)參考實(shí)驗(yàn)室已納入大量對(duì)照組以確保操作中每一步的質(zhì)量：定量DNA / RNA對(duì)照組以評(píng)估每個(gè)臨床樣品的質(zhì)量，提取對(duì)照組每個(gè)DNA / RNA提取循環(huán)以確保沒(méi)有污染，和內(nèi)部陽(yáng)性和陰性對(duì)照以驗(yàn)證每個(gè)實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)的最佳性能和沒(méi)有污染。賈第蟲(chóng)屬PCR檢測(cè)的主要適應(yīng)癥是用于確定感染物種是否是人畜共患病集合物。后者測(cè)定可以在科羅拉多州立大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室（http://dLab.colostate.edu/）進(jìn)行。這種PCR檢測(cè)不同于在商業(yè)參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的貓腹瀉實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)（IDEXX Laboratories，Westbrook，Maine）或貓胃腸道快速PCR檢測(cè)（Antech Diagnostics，Irvine，California）。PCR可用于診斷幼貓隱孢子蟲(chóng)屬，然而作者更喜歡采用DFA檢測(cè)可以在熒光顯微鏡下直接觀(guān)察卵囊。C. felis和C. canis的檢測(cè)并不能證明誰(shuí)是引起臨床疾病的原因。糞便PCR檢測(cè)推薦用于診斷貓三毛滴蟲(chóng)感染。然而，貓三毛滴蟲(chóng)的DNA可以在健康貓攜帶者中檢測(cè)到，所以陽(yáng)性結(jié)果必須結(jié)合動(dòng)物病史，體檢檢查和環(huán)境進(jìn)行解釋。PCR是檢測(cè)沙門(mén)氏菌屬和彎曲桿菌屬DNA的敏感方法，但如前所述，陽(yáng)性結(jié)果并不一定需要抗生素治療。在貓中，糞便PCR檢測(cè)梭菌屬的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值低，最好與毒素免疫分析結(jié)合使用以提高診斷率。逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR用于檢測(cè)糞便中的冠狀病毒RNA，然而陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果并不能區(qū)分FECV和FIP誘導(dǎo)菌株，并且健康非腹瀉貓的冠狀病毒發(fā)病率很高。
臨床醫(yī)師有責(zé)任意識(shí)到每個(gè)糞便診斷測(cè)試的局限性和益處，并認(rèn)識(shí)到僅僅檢測(cè)糞便中假定的腸病原體的DNA或檢測(cè)賈第鞭毛蟲(chóng)屬包囊或隱孢子蟲(chóng)屬卵囊并不能說(shuō)明因果關(guān)系。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，一只幼貓表現(xiàn)出結(jié)腸炎跡象（里急后重，便血，糞便黏液增加，糞便量小，頻率明顯增加）并且糞便漂浮或ELISA檢測(cè)證明賈第鞭毛蟲(chóng)屬感染，這只貓應(yīng)該還有另一個(gè)引起結(jié)腸炎癥狀的原因，因?yàn)橘Z第鞭毛蟲(chóng)是一種小腸病原體。應(yīng)進(jìn)一步調(diào)查小貓結(jié)腸炎的已知病因（例如三毛滴蟲(chóng)、彎曲桿菌屬、產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難梭狀桿菌和食物不耐受）。
今天給大家分享的是“懷疑幼貓感染性腹瀉診斷”的一些研究結(jié)果。明天將給大家分享“對(duì)幼貓不明原因腹瀉的經(jīng)驗(yàn)性治療”的相關(guān)知識(shí)，請(qǐng)持續(xù)關(guān)注公眾號(hào)！
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